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　　?大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒實驗使用說明書主要包括試劑的保存、試劑的準備、操作流程及注意事項等部分?。

　　試劑的保存

　　試劑盒應保存在-20℃(較長時間不用時)或2-8℃(頻繁使用時)?。

　　濃洗滌液低溫保存時可能會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶?。

　　試劑的準備

　　試劑應按說明儲存，用前恢復到室溫。稀釋后的標準品應丟棄，不可保存?3。

　　使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器?。

　　用干凈的塑料容器配置洗滌液，用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?。

　　操作流程

　　待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl?。

　　酶標板置4℃，包被過夜?1。

　　洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液洗滌3-4次?。

　　陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的抗體工作液50μl(具體抗體根據(jù)實驗需求選擇)?。

　　酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min?。

　　再次洗板?。

　　加入底物，反應后加終止液，用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)濃度?。

　　注意事項

　　實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)?。

　　不用的其它試劑應包裝好或蓋好，保質(zhì)前使用。不同批號的試劑不要混用?3。

　　洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水?。

　　底物A易揮發(fā)，避免長時間打開蓋子;底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下，且有毒，實驗完成后應立即讀取OD值?。

　　加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣?。

　　請嚴格按照說明書操作，以確保實驗結(jié)果的準確性。