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　　本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)，本生，您信任的合作伙伴！本生試劑盒

　　以下是小鼠鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明書：

　　一、試劑盒概述

　　?用途?：用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中小鼠鈣調(diào)磷酸酶(CaN)的含量。

　　?產(chǎn)地與品牌?：不同品牌的試劑盒可能產(chǎn)自不同地方，例如天津本生或天正信達(dá)生物。

　　BS-9284小鼠鈣調(diào)磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒

　　?包裝規(guī)格?：通常有48T和96T兩種規(guī)格。

　　?保存條件?：2~8℃保存。

　　?有效期?：一般為6個月，具體以說明書為準(zhǔn)。

　　二、實(shí)驗(yàn)原理

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠鈣調(diào)磷酸酶(CaN)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠鈣調(diào)磷酸酶(CaN)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。

　　三、樣本處理及要求

　　?血清?：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　?血漿?：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2~8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　?組織勻漿?：用預(yù)冷的PBS(0.01M，pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

　　?細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本?：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　四、試劑盒組成

　　試劑盒通常包含以下組件(具體以說明書為準(zhǔn))：

　　微孔酶標(biāo)板

　　標(biāo)準(zhǔn)品

　　樣本稀釋液

　　檢測抗體-HRP

　　20×洗滌緩沖液

　　底物A、B

　　終止液

　　封板膜

　　說明書

　　自封袋

　　其他可能包含的配件(如空白稀釋板、橡膠手套等)

　　五、操作步驟

　　從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。

　　樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

　　除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。

　　棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1分鐘，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

　　每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分鐘。

　　每孔加入終止液50μL，混勻后在30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測定各孔的OD值。

　　六、注意事項(xiàng)

　　所有OD值建議減除空白值后再行計(jì)算，如空白OD低于0.1，也可以直接計(jì)算。

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，手工繪制或用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品OD值計(jì)算出相應(yīng)含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。

　　在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時建議作雙孔檢測，每次檢測都應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　洗滌過程很關(guān)鍵，洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯誤地升高。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象，37℃水浴使結(jié)晶溶解后再配制洗滌液。

　　檢測時所有試劑都要恢復(fù)到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中2個月內(nèi)用完。

　　試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物，屬正?，F(xiàn)象，不影響結(jié)果判讀。

　　僅用于科研，不能用于臨床診斷。

　　請按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。不同品牌的試劑盒在具體操作步驟和試劑組成上可能有所差異，因此在使用前務(wù)必仔細(xì)閱讀并遵循相應(yīng)品牌的說明書。